菌種生產(chǎn)流程，一般涵蓋母種、原種和栽培種三個(gè)層次，這也就是我們常說(shuō)的一級(jí)、二級(jí)、三級(jí)菌種。在這三個(gè)層次中，母種的分離與選育需要較高的技術(shù)性和精細(xì)化要求，而原種與栽培種的制作則相對(duì)簡(jiǎn)化。接下來(lái)，我們將逐一探討各級(jí)菌種的制作技術(shù)。

一、母種的分離與選育

母種是菌種生產(chǎn)流程中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，其分離與選育主要依賴(lài)人工選擇、誘變育種、雜交育種以及原生質(zhì)融合等技術(shù)。對(duì)于大多數(shù)制種專(zhuān)業(yè)戶(hù)來(lái)說(shuō)，人工選擇是一種簡(jiǎn)單而實(shí)用的方法。具體來(lái)說(shuō)，就是通過(guò)觀察菌落的形態(tài)、色澤等特征，挑選出符合要求的菌株進(jìn)行分離與培育。接下來(lái)，我們將詳細(xì)介紹人工選擇的具體步驟與操作方法。

1、種源采集

從野生成或人工栽培的群體中，精心挑選出具有代表性的優(yōu)良菇體，作為種源。挑選標(biāo)準(zhǔn)包括：菇體成熟度適中，朵形圓正，肉質(zhì)肥厚，且無(wú)病蟲(chóng)害。采集1-2朵符合這些標(biāo)準(zhǔn)的種菇，并編上號(hào)碼，作為分離母種的材料。若從栽培室采集，則應(yīng)標(biāo)明原菌株的代號(hào)。

2、培養(yǎng)基配制

采用瓊脂培養(yǎng)基，又稱(chēng)PDA培養(yǎng)基。其常用配方為：馬鈴薯200-250克，瓊脂15-20克，葡萄糖20-25克，清水1000毫升。此外，還可以加入硫酸鎂1-1.5克，維生素B1微量，以及磷酸二氫鉀2-3克以增強(qiáng)培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)。制作過(guò)程中，需先將馬鈴薯洗凈去皮后切成薄片，煮沸30分鐘并過(guò)濾取汁。接著加入瓊脂并攪拌至充分溶化，再加入葡萄糖等其他成分，過(guò)濾后裝入玻璃試管或三角瓶?jī)?nèi)，進(jìn)行高壓滅菌。滅菌完成后，趁熱將試管斜排或三角瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基冷卻，即成為固體斜面培養(yǎng)基。

3、母種分離方法

有孢子彈射、組織分離和基內(nèi)分離三種方法可供選擇。(1)孢子彈射法。種菇經(jīng)表面消毒并吸干水分后，可將其懸掛于裝有瓊脂培養(yǎng)基的三角瓶?jī)?nèi)，讓孢子自然散落在培養(yǎng)基上萌發(fā)菌絲?；蛘呒羧∫恍K菇體貼附在試管斜面培養(yǎng)基上，讓孢子散落并萌發(fā)菌絲，從而獲得母種。(2)組織分離法。種菇經(jīng)消毒后，在接種箱內(nèi)用手或刀片從菇柄處對(duì)半解開(kāi)，取一小塊菇體縱切成5毫米x10毫米的小薄片，用接種針挑取一塊接入斜面培養(yǎng)基中央，待其萌發(fā)菌絲后即可得到母種。(3)基內(nèi)分離法。選擇已長(zhǎng)菇的木段，經(jīng)酒精和升汞水消毒后，將小薄片劈成0.5-1厘米寬的小條接入斜面培養(yǎng)基中央?；蛘邚囊验L(zhǎng)菇的菌袋中鉤取色澤純、長(zhǎng)勢(shì)旺的菌絲體接入試管斜面培養(yǎng)基中央，待其萌發(fā)菌絲后同樣可獲得母種。

4、適溫培養(yǎng)

將通過(guò)不同方式分離得到的菌種接種于試管后，需及時(shí)移入已消毒的培養(yǎng)箱或培養(yǎng)室，并將溫度控制在約25℃，以利于孢子或菌絲的發(fā)育。一般情況下，孢子彈射后約3至4天，孢子會(huì)開(kāi)始萌發(fā)成菌落，而10天后菌絲即可長(zhǎng)滿(mǎn)試管。對(duì)于組織分離，接種后2至3天菌絲便會(huì)開(kāi)始萌發(fā)，并在培養(yǎng)基上逐漸蔓延。菇木分離接種后，菌絲的恢復(fù)生長(zhǎng)則需要大約7天的時(shí)間。

5、選育提純

經(jīng)過(guò)上述培養(yǎng)得到的菌絲，并非全部都是優(yōu)質(zhì)菌絲。因此，在菌絲萌發(fā)并開(kāi)始生長(zhǎng)后，需要仔細(xì)觀察，挑選出色澤純正、健壯且長(zhǎng)勢(shì)良好的菌絲。在接種箱內(nèi)，將這些優(yōu)選的菌絲連同培養(yǎng)基一同鉤取，并接入到另外準(zhǔn)備好的試管培養(yǎng)基中。在恒溫23至25℃的條件下繼續(xù)培養(yǎng)7至10天，待菌絲再次長(zhǎng)滿(mǎn)試管后，進(jìn)行再次觀察和擇優(yōu)選取，即可得到“母代”母種。

6、轉(zhuǎn)管擴(kuò)接

“母代”母種可以進(jìn)一步轉(zhuǎn)管擴(kuò)接成“子代”母種。這個(gè)過(guò)程需要使用相同的斜面培養(yǎng)基，并且每支母代母種可以擴(kuò)接出30至50支子代母種。在生產(chǎn)過(guò)程中，通常供應(yīng)的是子代母種，它還可以進(jìn)行再次轉(zhuǎn)管擴(kuò)接。但需要注意的是，每次轉(zhuǎn)管擴(kuò)接的數(shù)量應(yīng)控制在20至25支，并且整個(gè)轉(zhuǎn)管過(guò)程不得超過(guò)5次。

7、出菇試驗(yàn)

經(jīng)過(guò)分離選育得到的母種，還需要進(jìn)行出菇試驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證其是否可用于實(shí)際生產(chǎn)。試驗(yàn)方法是將母種接種到瓶裝或袋裝的木屑培養(yǎng)基上，并根據(jù)不同菇耳種性的溫度要求進(jìn)行適溫培養(yǎng)。只有當(dāng)菇耳成功出菇時(shí)，才能證明該母種真正適合用于生產(chǎn)。

接下來(lái)，我們進(jìn)入原種繁殖培養(yǎng)的部分。將經(jīng)過(guò)選育的母種接種到瓶裝或袋裝的木屑培養(yǎng)基上，并通過(guò)適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)條件，即可成功繁殖出原種。在繁殖過(guò)程中，需要嚴(yán)格控制技術(shù)要求，以確保繁殖出的原種具有優(yōu)良的品質(zhì)和適應(yīng)性。

1、原種木屑培養(yǎng)基的制備

選用雜木屑作為主要成分，占比77.5%，再加入麥麩20%，蔗糖1%，石膏粉1.2%以及硫酸鎂0.3%。在滅菌前的pH值應(yīng)控制在6.5至7的范圍內(nèi)，同時(shí)調(diào)整含水量至60%。將上述原料充分混合后，裝入750毫升的玻璃菌種瓶中，注意裝料時(shí)下松上緊的原則。瓶口用棉花塞緊，并用牛皮紙包裹住瓶頸與棉塞，以防止污染。隨后，將培養(yǎng)基放入高壓滅菌鍋中，在147千帕/平方厘米的壓力下滅菌2至2.5小時(shí)。或者，也可以選擇常壓滅菌方式，在100℃下保持10至11小時(shí)，滅菌完成后趁熱取出，讓其自然冷卻。

2、菌種接入

當(dāng)料溫降至25℃以下時(shí)，在無(wú)菌條件下，將試管種分割成若干份，通過(guò)酒精燈火焰的短暫灼燒后，迅速接入原種培養(yǎng)基上。每支母種可接入4至6瓶原種。

3、發(fā)菌培養(yǎng)

接種后的玻璃菌種瓶需立即移入25℃的菌種培養(yǎng)室中，并保持空間相對(duì)濕度在70%以上，同時(shí)避免強(qiáng)光直射。不同菇類(lèi)所需的培養(yǎng)時(shí)間有所不同，一般菇類(lèi)需要40至50天的培養(yǎng)周期，而草菇和銀耳則只需15至20天。

4、去雜選優(yōu)

在原種培育過(guò)程中，需每天進(jìn)行細(xì)致觀察。一旦發(fā)現(xiàn)雜菌污染的跡象，應(yīng)立即將受污染的原種淘汰，以確保培養(yǎng)的質(zhì)量。

二、栽培種擴(kuò)大培育

將原種進(jìn)一步擴(kuò)接至相同的木屑培養(yǎng)基上，經(jīng)過(guò)適溫條件下的30至35天培養(yǎng)，即可獲得栽培種，這種栽培種可直接用于生產(chǎn)栽培。在栽培種的生產(chǎn)過(guò)程中，我們通常選用750毫升的菌種專(zhuān)用瓶，但考慮到使用量較大，聚丙烯菌種袋（規(guī)格有12厘米x24厘米、15厘米x28厘米、17厘米x33厘米等）則更為常用，選擇時(shí)需依據(jù)各種菇耳的特性和當(dāng)?shù)氐牧?xí)慣。

培養(yǎng)基的滅菌工作至關(guān)重要，我們采用常壓滅菌灶，確保滅菌溫度達(dá)到100℃，并持續(xù)8至10小時(shí)。滅菌完成后，應(yīng)趁熱卸袋并讓其自然冷卻。當(dāng)料溫降至25℃以下后，便可在無(wú)菌環(huán)境下接入選定品種的原種。每瓶原種能夠擴(kuò)接成50至60瓶栽培種。

在菌種培育室中，我們需要保持環(huán)境干凈、避免強(qiáng)光直射，并將室溫控制在23至25℃的范圍內(nèi)。培育過(guò)程中應(yīng)定期檢查，一旦發(fā)現(xiàn)雜菌污染，需立即淘汰，以確保菌種的優(yōu)質(zhì)。當(dāng)菌絲充滿(mǎn)菌種袋，且尖端菌絲出現(xiàn)上爬現(xiàn)象時(shí)，便意味著栽培種已達(dá)到適齡狀態(tài)。