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食用菌培養(yǎng)基
它是根據(jù)各種食用菌生長(zhǎng)時(shí)對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的要求而采用人工方法配制成的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)，以便給菌絲生長(zhǎng)發(fā)育提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。就如同農(nóng)作物需要土壤、肥料，動(dòng)物需要飼料一樣。
培養(yǎng)基種類
目前，人們采用的培養(yǎng)基相當(dāng)多，種類各不相同。不論哪種培養(yǎng)基都有共同特點(diǎn)：一般都含有水分、碳源、氮源、無機(jī)鹽以及生長(zhǎng)因素等。水分是食用菌的組成成分，食用菌在生理活動(dòng)中，需要在有水的情況下進(jìn)行。碳源是構(gòu)成細(xì)胞物質(zhì)的主要元素，也是食用菌生長(zhǎng)發(fā)膏所需能量來源。碳源的主要原料是糖類、淀粉、纖維素物質(zhì)。代表物質(zhì)是葡萄糖、蔗糖、玉米粉、麩皮、米糠、鋸木、棉籽殼等。氮源是食用菌細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中蛋白質(zhì)和核酸的主要元素，蛋白質(zhì)和核酸是生命的基本物質(zhì)。一切生命活動(dòng)都離不開這些物質(zhì)。氮源主要有氨基酸、蛋白胨、尿素、硫酸銀、含有氮素的物質(zhì)有玉米、棉籽殼。培養(yǎng)基中的無機(jī)鹽雖用量不多；但不可缺少。它主要是酶類的組成成分，調(diào)節(jié)各種生命代謝活動(dòng)。如磷酸二氫鉀、硫酸鎂。 生長(zhǎng)因素需要量很少，是培養(yǎng)基中的特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，它是維持食用菌正常生長(zhǎng)所不可缺少的生長(zhǎng)因素。如馬鈴薯、麩皮、米糠等都含有豐富的生長(zhǎng)因素，維生素也屬此類。
根據(jù)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的來源，黃年來等同志進(jìn)行了細(xì)致的分類，把所有培養(yǎng)基分成三大類：
1.天然培養(yǎng)基：它是利用天然的有機(jī)物配制而成的培養(yǎng)基。這種培養(yǎng)基來源廣，成本低，很適合實(shí)胨生產(chǎn)。特別具備營(yíng)養(yǎng)豐富、制備方便、經(jīng)濟(jì)實(shí)用等優(yōu)點(diǎn)。但他學(xué)成分不能定量，每批成分也不穩(wěn)定，因此不宜用來進(jìn)行精確的科學(xué)實(shí)驗(yàn)。常用的天然培養(yǎng)基，有馬鈴薯培養(yǎng)基、麥芽汁培養(yǎng)基、杏汁培養(yǎng)基、蘋果培養(yǎng)基、麥芽培養(yǎng)基、堆肥培養(yǎng)基等。
2.半合成培養(yǎng)基：在天然培養(yǎng)基中，適當(dāng)增加無機(jī)鹽類，或在合成培養(yǎng)基中添加少量別的有機(jī)物，成為半合成培養(yǎng)基，介于天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基之間。主要目的是促進(jìn)菌絲生長(zhǎng)發(fā)膏。
3.合成培養(yǎng)基：用化學(xué)成分已知的有機(jī)物或無機(jī)物配制而成的培養(yǎng)基。由于各種化學(xué)成分已經(jīng)清楚，容易控制，所以適合某些定性和定量研究。
食用菌母種分離用培養(yǎng)基的制作
食用菌的母種就是從孢子分離培養(yǎng)或組織分離培養(yǎng)獲得的菌絲體。一般常在瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)。
1.馬鈴薯—蔗糖—瓊脂培養(yǎng)基（即PDA培養(yǎng)基），一般食用菌母種分離和培養(yǎng)都適合此培養(yǎng)基，也稱基礎(chǔ)培養(yǎng)基：馬鈴薯煮汁 1000毫升 蔗糖 20克 瓊脂20克 PH值 5.5～6.0
制法：先將新鮮無病害的馬鈴薯洗凈，去皮后切成小薄片，稱200克，加水1000毫升，煮沸20分鐘后過濾，其濾汁為馬鈴薯煮汁。然后加瓊脂和蔗糖煮溶，后補(bǔ)足水分至1000毫升，裝管（瓶）滅菌備用。
2.葡萄糖—麥芽膏—酵母膏培養(yǎng)基（GMY）：麥芽膏 10克 葡萄糖 11克 酵母膏 4克 瓊脂 18克 水 加至1000毫升 PH值 自然
麥芽膏可用麥芽汁代替，10克麥芽膏可用18克勃力克司濃度的麥芽汁600毫升代替。
3.黃豆餅粉培養(yǎng)基：黃豆餅粉 40克 葡萄糖或蔗糖 20克 瓊脂 18克 水 1000毫升 PH值 自然
制法：稱黃豆餅粉40克用清水調(diào)成糊狀，再加水1000 毫升，煮沸后30分鐘，過濾，用熱水補(bǔ)足1000毫升，加入瓊脂蔗糖溶化即可分裝試管。
4.玉米粉培養(yǎng)基：玉米粉 30克 蛋白胨 20克 蔗糖 20克 瓊脂 18克 水 1000毫升 pH值 自然
5.木汁麥麩（米糠）培養(yǎng)基：麥麩（米糠） 100克 硫酸鐵 1克 蔗糖 20克 瓊脂 20克 水 1000毫升 pH值 5～6
制法：將木屑用雙層紗布包嚴(yán)煮沸20分鐘取出木屑包，補(bǔ)足1000毫升水，加入瓊脂、糖等拌勻溶化即可。
6.麥粒培養(yǎng)基：小麥粒 200克 糖 5克 碳酸鈣 15克 水 500毫升 PH值 自然
制法：取小麥200克洗凈，置鍋中加水500毫升，煮沸20分鐘，加入其他成分，煮5分鐘，用紗布過濾，水汁分 裝至試管的 1／3長(zhǎng)度為好。
7.杏汁培養(yǎng)基（適合樸菇子實(shí)體的發(fā)生）：干杏 25克 瓊脂 15—30克 水 1000毫升 PH值 自然
8.胡蘿卜培養(yǎng)基（代替馬鈴薯）：胡蘿卜 100克 糖 18～25克 瓊脂 20克 水 1000毫升
9.蘋果培養(yǎng)基（適于草菇生長(zhǎng)）：蘋果（壓碎） 100克 蛋白胨 2克 蔗糖 20克 瓊脂 20克 水 1000毫升
10.高粱培養(yǎng)基（特別適于平菇類生長(zhǎng)）：高粱粉 30克 瓊脂 10克 水 1000毫升
11.糞汁培養(yǎng)基（供篩選蘑菇菌種）：馬廄肥 150克 玉米粉（取湯） 30克 瓊脂 20～30克 水 1000毫升
12.酸性培養(yǎng)基（供分離菌種及培養(yǎng)猴頭菌）：馬鈴薯（去皮） 200～250克 糖 20克 瓊脂 25克 檸檬酸 1％～5％（滅菌后加人） 水 1000毫升
原種、栽培種培養(yǎng)料的制備
原種是由母種繁殖而來，進(jìn)而制成栽培種，用于播種、生產(chǎn)。
1.糞草培養(yǎng)基（適于制作蘑菇菌種）：糞草(糞：草=6：4、堆積發(fā)酵15～20天) 90斤 米糠或麩皮 8斤碳酸鈣 1斤 糖 1斤 水 適量
2.麥粒培養(yǎng)基（適于制作蘑菇、鳳尾菇、毛木耳菌種）：浸濕蒸透的麥粒 88％木屑 10％ 石膏 2％ 水 50％一60％
3.木屑米糠培養(yǎng)基（適宜各種木生食用菌的制作）：闊葉樹木屑 70％～80％ 米糠或麩皮 20％～28％ 碳酸鈣 1％蔗糖 1％ 石膏 1％ 水 調(diào)至適量
4.棉皮培養(yǎng)基（平菇、鳳尾菇）：棉籽殼 99％ 石膏粉 1％ 石灰3％
5.玉米芯培養(yǎng)基：玉米芯 99％石膏粉 1％
6.稻草培養(yǎng)基：稻草 94％ 麩皮 5％ 石膏 1％蔗糖 1％
7.棉皮木屑培養(yǎng)基：棉皮 78％ 木屑 20％ 蔗糖 1％石膏 1％ 水料比為 1.2～1.3：1
8.羊屎培養(yǎng)基（蘑菇）： 在侵漉屎中，加入1％～3％碳酸鈣或1％石灰。
9.玉米稈粉培養(yǎng)基：玉米稈 78％麩皮 21％ 石膏 1％
棉塞、牛皮紙蓋、衛(wèi)生紙氣塞的制作
根據(jù)所栽培的品種選擇適宜培養(yǎng)基，然后即可將培養(yǎng)基分裝。分裝是指瓊脂培養(yǎng)基分裝和原種、栽培種分裝。 裝好培養(yǎng)基的試管、三角瓶或菌種瓶，應(yīng)立即塞上大小適合的棉塞，以防雜菌侵入培養(yǎng)基。所用的棉花、以白色長(zhǎng)絨的不脫脂棉花為理想。也可用人造塑料海綿代替棉花作瓶塞，效果很好。棉塞表面要光滑，松緊度要適當(dāng)。溫差變化比較大的地方，棉塞要塞緊一些。制作棉花塞時(shí)，先把棉花鋪開，撕成5～6厘米寬的長(zhǎng)條，用手握緊，粗度適當(dāng)，棉塞要稍緊密，塞入后也不能起皺成溝。否則容易掉落，雜菌也容易跑進(jìn)培養(yǎng)基。塞好棉塞的空試管，可用烘干箱加熱到15℃左右，干熱滅菌1小時(shí)后備用。 菌種瓶棉塞和試管相同，只是粗細(xì)之別。 另外，缺少棉花的地方，可用雙層牛皮紙中間加一層棉花作瓶塞。 還可用耐高溫塑料紙作瓶塞。目前有些地方的菌種瓶是塑料紙中間打一小孔用膠布封嚴(yán)，接種時(shí)只要按操作把菌種放入小孔的辦法，也可采用。母種試管口用衛(wèi)生紙作透氣塞。裝好培養(yǎng)基后，試管口擦干凈，把衛(wèi)生紙（普通或高級(jí)均可），卷成同試管口一樣粗細(xì)的筒，剪成5厘米長(zhǎng)的小段，每段塞入試管內(nèi)3厘米，外留2厘米，再扎成捆，用牛皮紙包嚴(yán)、滅菌。接種后還可用塑料膠布將試管口與衛(wèi)生紙聯(lián)封。培養(yǎng)按常規(guī)辦法。原種瓶或栽培種瓶用衛(wèi)生紙作通氣寨時(shí)，先按一定配方裝滿瓶后，洗凈瓶?jī)?nèi)外壁，把衛(wèi)生紙剪成5厘米寬條幅，每條卷成同瓶口一樣大小的簡(jiǎn)，塞入瓶?jī)?nèi)3厘米，外留2厘米；滅菌后接種、培養(yǎng)。 塑料袋制種時(shí)，若用"兩頭"接種，裝料后扎緊兩頭，然后將衛(wèi)生紙剪成3厘米長(zhǎng)、1厘米粗的小卷，用牛皮紙包 嚴(yán)同塑料袋一起裝鍋滅菌，再放入接種箱消毒，操作時(shí)將袋口解開，接入菌種，再將衛(wèi)生紙小卷夾在袋口中間，用線繩或皮筋扎緊即成。接種完畢后，按常規(guī)放入培養(yǎng)室管理。用塑料袋生料栽培食用菌時(shí)，兩頭可用衛(wèi)生紙作通氣塞。 通過我們多次試驗(yàn)，衛(wèi)生紙作透氣塞，不會(huì)像棉花那樣濕塞，避免了因濕塞而引起雜菌污染；衛(wèi)生紙通氣性能好、吸水性強(qiáng)、雜菌少，蒸發(fā)到瓶口的水珠不易積于料面；以往我們用棉花、塑料環(huán)，成本高，工序多，用衛(wèi)生紙可大大降低成本。
培養(yǎng)基的滅菌
按上述培養(yǎng)基裝好后就要立即進(jìn)行滅菌；將其中的雜菌殺死，然后才能接入我們所需要的純菌種，進(jìn)行培養(yǎng)。不論是母種分離時(shí)用的斜面培養(yǎng)基，還是原種、栽培種瓶培養(yǎng)基或聚丙烯塑料袋培養(yǎng)基，一般都采用熱力滅菌法。 高壓蒸汽滅菌法：若是斜面試管培養(yǎng)基。應(yīng)先用牛皮紙?jiān)衫Γ瑯?biāo)明棉塞為上端部分，然后豎直放入高壓鍋內(nèi)，進(jìn)行滅菌。在1．5公斤／平方厘米壓力下維持30分鐘，即可達(dá)到滅菌目的。開鍋取試管時(shí)，趁熱放成斜面。經(jīng)試驗(yàn)若無雜菌，可用。若有雜菌時(shí)，重新滅菌。 滅菌材料如是原種和栽培種，應(yīng)在15公斤／平方厘米壓力保持60～90分鐘。這樣才能達(dá)到滅菌目的。達(dá)到所規(guī) 定的時(shí)間后，應(yīng)?；鸩⒅饾u排去蒸汽。待壓力表的指針回復(fù)零位時(shí)，再把消毒鍋的螺栓旋開，打開蓋子，取出瓶子。?；鹋牌麜r(shí)必須注意，排汽閥不能一下子放大，只有一點(diǎn)一點(diǎn)開，讓壓力表慢慢地回復(fù)到原位，然后再揭鍋蓋。如果排汽過猛，鍋內(nèi)壓力急速下降，則會(huì)造成棉塞脫落和玻璃容器破損。常壓蒸汽滅菌法：如沒有具備高壓鍋，可用土蒸鍋或蒸籠進(jìn)行。在常壓的條件下，以 100℃的溫度持續(xù)6-8小時(shí)，以殺死培養(yǎng)料中的各種雜菌。也可常壓間歇滅菌3次?？上日?小時(shí)，然后隔24小時(shí)又如法蒸1次，連續(xù)3次，就可達(dá)到滅菌目的。 培養(yǎng)基的滅菌效果要經(jīng)常檢驗(yàn)，是否滅菌徹底：一般情況下，滅菌后的培養(yǎng)基最好應(yīng)放在要培養(yǎng)的溫度下，空白培養(yǎng)1周，可檢查滅菌效果。如果在這一段時(shí)間內(nèi)培養(yǎng)基沒發(fā)生任何變化，說明滅菌效果良好，可以使用。
食用菌培養(yǎng)基
它是根據(jù)各種食用菌生長(zhǎng)時(shí)對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的要求而采用人工方法配制成的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)，以便給菌絲生長(zhǎng)發(fā)育提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。就如同農(nóng)作物需要土壤、肥料，動(dòng)物需要飼料一樣。
培養(yǎng)基種類
目前，人們采用的培養(yǎng)基相當(dāng)多，種類各不相同。不論哪種培養(yǎng)基都有共同特點(diǎn)：一般都含有水分、碳源、氮源、無機(jī)鹽以及生長(zhǎng)因素等。水分是食用菌的組成成分，食用菌在生理活動(dòng)中，需要在有水的情況下進(jìn)行。碳源是構(gòu)成細(xì)胞物質(zhì)的主要元素，也是食用菌生長(zhǎng)發(fā)膏所需能量來源。碳源的主要原料是糖類、淀粉、纖維素物質(zhì)。代表物質(zhì)是葡萄糖、蔗糖、玉米粉、麩皮、米糠、鋸木、棉籽殼等。氮源是食用菌細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中蛋白質(zhì)和核酸的主要元素，蛋白質(zhì)和核酸是生命的基本物質(zhì)。一切生命活動(dòng)都離不開這些物質(zhì)。氮源主要有氨基酸、蛋白胨、尿素、硫酸銀、含有氮素的物質(zhì)有玉米、棉籽殼。培養(yǎng)基中的無機(jī)鹽雖用量不多；但不可缺少。它主要是酶類的組成成分，調(diào)節(jié)各種生命代謝活動(dòng)。如磷酸二氫鉀、硫酸鎂。 生長(zhǎng)因素需要量很少，是培養(yǎng)基中的特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，它是維持食用菌正常生長(zhǎng)所不可缺少的生長(zhǎng)因素。如馬鈴薯、麩皮、米糠等都含有豐富的生長(zhǎng)因素，維生素也屬此類。
根據(jù)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的來源，黃年來等同志進(jìn)行了細(xì)致的分類，把所有培養(yǎng)基分成三大類：
1.天然培養(yǎng)基：它是利用天然的有機(jī)物配制而成的培養(yǎng)基。這種培養(yǎng)基來源廣，成本低，很適合實(shí)胨生產(chǎn)。特別具備營(yíng)養(yǎng)豐富、制備方便、經(jīng)濟(jì)實(shí)用等優(yōu)點(diǎn)。但他學(xué)成分不能定量，每批成分也不穩(wěn)定，因此不宜用來進(jìn)行精確的科學(xué)實(shí)驗(yàn)。常用的天然培養(yǎng)基，有馬鈴薯培養(yǎng)基、麥芽汁培養(yǎng)基、杏汁培養(yǎng)基、蘋果培養(yǎng)基、麥芽培養(yǎng)基、堆肥培養(yǎng)基等。
2.半合成培養(yǎng)基：在天然培養(yǎng)基中，適當(dāng)增加無機(jī)鹽類，或在合成培養(yǎng)基中添加少量別的有機(jī)物，成為半合成培養(yǎng)基，介于天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基之間。主要目的是促進(jìn)菌絲生長(zhǎng)發(fā)膏。
3.合成培養(yǎng)基：用化學(xué)成分已知的有機(jī)物或無機(jī)物配制而成的培養(yǎng)基。由于各種化學(xué)成分已經(jīng)清楚，容易控制，所以適合某些定性和定量研究。
食用菌母種分離用培養(yǎng)基的制作
食用菌的母種就是從孢子分離培養(yǎng)或組織分離培養(yǎng)獲得的菌絲體。一般常在瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)。
1.馬鈴薯—蔗糖—瓊脂培養(yǎng)基（即PDA培養(yǎng)基），一般食用菌母種分離和培養(yǎng)都適合此培養(yǎng)基，也稱基礎(chǔ)培養(yǎng)基：馬鈴薯煮汁 1000毫升 蔗糖 20克 瓊脂20克 PH值 5.5～6.0
制法：先將新鮮無病害的馬鈴薯洗凈，去皮后切成小薄片，稱200克，加水1000毫升，煮沸20分鐘后過濾，其濾汁為馬鈴薯煮汁。然后加瓊脂和蔗糖煮溶，后補(bǔ)足水分至1000毫升，裝管（瓶）滅菌備用。
2.葡萄糖—麥芽膏—酵母膏培養(yǎng)基（GMY）：麥芽膏 10克 葡萄糖 11克 酵母膏 4克 瓊脂 18克 水 加至1000毫升 PH值 自然
麥芽膏可用麥芽汁代替，10克麥芽膏可用18克勃力克司濃度的麥芽汁600毫升代替。
3.黃豆餅粉培養(yǎng)基：黃豆餅粉 40克 葡萄糖或蔗糖 20克 瓊脂 18克 水 1000毫升 PH值 自然
制法：稱黃豆餅粉40克用清水調(diào)成糊狀，再加水1000 毫升，煮沸后30分鐘，過濾，用熱水補(bǔ)足1000毫升，加入瓊脂蔗糖溶化即可分裝試管。
4.玉米粉培養(yǎng)基：玉米粉 30克 蛋白胨 20克 蔗糖 20克 瓊脂 18克 水 1000毫升 pH值 自然
5.木汁麥麩（米糠）培養(yǎng)基：麥麩（米糠） 100克 硫酸鐵 1克 蔗糖 20克 瓊脂 20克 水 1000毫升 pH值 5～6
制法：將木屑用雙層紗布包嚴(yán)煮沸20分鐘取出木屑包，補(bǔ)足1000毫升水，加入瓊脂、糖等拌勻溶化即可。
6.麥粒培養(yǎng)基：小麥粒 200克 糖 5克 碳酸鈣 15克 水 500毫升 PH值 自然
制法：取小麥200克洗凈，置鍋中加水500毫升，煮沸20分鐘，加入其他成分，煮5分鐘，用紗布過濾，水汁分 裝至試管的 1／3長(zhǎng)度為好。
7.杏汁培養(yǎng)基（適合樸菇子實(shí)體的發(fā)生）：干杏 25克 瓊脂 15—30克 水 1000毫升 PH值 自然
8.胡蘿卜培養(yǎng)基（代替馬鈴薯）：胡蘿卜 100克 糖 18～25克 瓊脂 20克 水 1000毫升
9.蘋果培養(yǎng)基（適于草菇生長(zhǎng)）：蘋果（壓碎） 100克 蛋白胨 2克 蔗糖 20克 瓊脂 20克 水 1000毫升
10.高粱培養(yǎng)基（特別適于平菇類生長(zhǎng)）：高粱粉 30克 瓊脂 10克 水 1000毫升
11.糞汁培養(yǎng)基（供篩選蘑菇菌種）：馬廄肥 150克 玉米粉（取湯） 30克 瓊脂 20～30克 水 1000毫升
12.酸性培養(yǎng)基（供分離菌種及培養(yǎng)猴頭菌）：馬鈴薯（去皮） 200～250克 糖 20克 瓊脂 25克 檸檬酸 1％～5％（滅菌后加人） 水 1000毫升
原種、栽培種培養(yǎng)料的制備
原種是由母種繁殖而來，進(jìn)而制成栽培種，用于播種、生產(chǎn)。
1.糞草培養(yǎng)基（適于制作蘑菇菌種）：糞草(糞：草=6：4、堆積發(fā)酵15～20天) 90斤 米糠或麩皮 8斤碳酸鈣 1斤 糖 1斤 水 適量
2.麥粒培養(yǎng)基（適于制作蘑菇、鳳尾菇、毛木耳菌種）：浸濕蒸透的麥粒 88％木屑 10％ 石膏 2％ 水 50％一60％
3.木屑米糠培養(yǎng)基（適宜各種木生食用菌的制作）：闊葉樹木屑 70％～80％ 米糠或麩皮 20％～28％ 碳酸鈣 1％蔗糖 1％ 石膏 1％ 水 調(diào)至適量
4.棉皮培養(yǎng)基（平菇、鳳尾菇）：棉籽殼 99％ 石膏粉 1％ 石灰3％
5.玉米芯培養(yǎng)基：玉米芯 99％石膏粉 1％
6.稻草培養(yǎng)基：稻草 94％ 麩皮 5％ 石膏 1％蔗糖 1％
7.棉皮木屑培養(yǎng)基：棉皮 78％ 木屑 20％ 蔗糖 1％石膏 1％ 水料比為 1.2～1.3：1
8.羊屎培養(yǎng)基（蘑菇）： 在侵漉屎中，加入1％～3％碳酸鈣或1％石灰。
9.玉米稈粉培養(yǎng)基：玉米稈 78％麩皮 21％ 石膏 1％
棉塞、牛皮紙蓋、衛(wèi)生紙氣塞的制作
根據(jù)所栽培的品種選擇適宜培養(yǎng)基，然后即可將培養(yǎng)基分裝。分裝是指瓊脂培養(yǎng)基分裝和原種、栽培種分裝。 裝好培養(yǎng)基的試管、三角瓶或菌種瓶，應(yīng)立即塞上大小適合的棉塞，以防雜菌侵入培養(yǎng)基。所用的棉花、以白色長(zhǎng)絨的不脫脂棉花為理想。也可用人造塑料海綿代替棉花作瓶塞，效果很好。棉塞表面要光滑，松緊度要適當(dāng)。溫差變化比較大的地方，棉塞要塞緊一些。制作棉花塞時(shí)，先把棉花鋪開，撕成5～6厘米寬的長(zhǎng)條，用手握緊，粗度適當(dāng)，棉塞要稍緊密，塞入后也不能起皺成溝。否則容易掉落，雜菌也容易跑進(jìn)培養(yǎng)基。塞好棉塞的空試管，可用烘干箱加熱到15℃左右，干熱滅菌1小時(shí)后備用。 菌種瓶棉塞和試管相同，只是粗細(xì)之別。 另外，缺少棉花的地方，可用雙層牛皮紙中間加一層棉花作瓶塞。 還可用耐高溫塑料紙作瓶塞。目前有些地方的菌種瓶是塑料紙中間打一小孔用膠布封嚴(yán)，接種時(shí)只要按操作把菌種放入小孔的辦法，也可采用。母種試管口用衛(wèi)生紙作透氣塞。裝好培養(yǎng)基后，試管口擦干凈，把衛(wèi)生紙（普通或高級(jí)均可），卷成同試管口一樣粗細(xì)的筒，剪成5厘米長(zhǎng)的小段，每段塞入試管內(nèi)3厘米，外留2厘米，再扎成捆，用牛皮紙包嚴(yán)、滅菌。接種后還可用塑料膠布將試管口與衛(wèi)生紙聯(lián)封。培養(yǎng)按常規(guī)辦法。原種瓶或栽培種瓶用衛(wèi)生紙作通氣寨時(shí)，先按一定配方裝滿瓶后，洗凈瓶?jī)?nèi)外壁，把衛(wèi)生紙剪成5厘米寬條幅，每條卷成同瓶口一樣大小的簡(jiǎn)，塞入瓶?jī)?nèi)3厘米，外留2厘米；滅菌后接種、培養(yǎng)。 塑料袋制種時(shí)，若用"兩頭"接種，裝料后扎緊兩頭，然后將衛(wèi)生紙剪成3厘米長(zhǎng)、1厘米粗的小卷，用牛皮紙包 嚴(yán)同塑料袋一起裝鍋滅菌，再放入接種箱消毒，操作時(shí)將袋口解開，接入菌種，再將衛(wèi)生紙小卷夾在袋口中間，用線繩或皮筋扎緊即成。接種完畢后，按常規(guī)放入培養(yǎng)室管理。用塑料袋生料栽培食用菌時(shí)，兩頭可用衛(wèi)生紙作通氣塞。 通過我們多次試驗(yàn)，衛(wèi)生紙作透氣塞，不會(huì)像棉花那樣濕塞，避免了因濕塞而引起雜菌污染；衛(wèi)生紙通氣性能好、吸水性強(qiáng)、雜菌少，蒸發(fā)到瓶口的水珠不易積于料面；以往我們用棉花、塑料環(huán)，成本高，工序多，用衛(wèi)生紙可大大降低成本。
培養(yǎng)基的滅菌
按上述培養(yǎng)基裝好后就要立即進(jìn)行滅菌；將其中的雜菌殺死，然后才能接入我們所需要的純菌種，進(jìn)行培養(yǎng)。不論是母種分離時(shí)用的斜面培養(yǎng)基，還是原種、栽培種瓶培養(yǎng)基或聚丙烯塑料袋培養(yǎng)基，一般都采用熱力滅菌法。 高壓蒸汽滅菌法：若是斜面試管培養(yǎng)基。應(yīng)先用牛皮紙?jiān)衫Γ瑯?biāo)明棉塞為上端部分，然后豎直放入高壓鍋內(nèi)，進(jìn)行滅菌。在1．5公斤／平方厘米壓力下維持30分鐘，即可達(dá)到滅菌目的。開鍋取試管時(shí)，趁熱放成斜面。經(jīng)試驗(yàn)若無雜菌，可用。若有雜菌時(shí)，重新滅菌。 滅菌材料如是原種和栽培種，應(yīng)在15公斤／平方厘米壓力保持60～90分鐘。這樣才能達(dá)到滅菌目的。達(dá)到所規(guī) 定的時(shí)間后，應(yīng)?；鸩⒅饾u排去蒸汽。待壓力表的指針回復(fù)零位時(shí)，再把消毒鍋的螺栓旋開，打開蓋子，取出瓶子。?；鹋牌麜r(shí)必須注意，排汽閥不能一下子放大，只有一點(diǎn)一點(diǎn)開，讓壓力表慢慢地回復(fù)到原位，然后再揭鍋蓋。如果排汽過猛，鍋內(nèi)壓力急速下降，則會(huì)造成棉塞脫落和玻璃容器破損。常壓蒸汽滅菌法：如沒有具備高壓鍋，可用土蒸鍋或蒸籠進(jìn)行。在常壓的條件下，以 100℃的溫度持續(xù)6-8小時(shí)，以殺死培養(yǎng)料中的各種雜菌。也可常壓間歇滅菌3次?？上日?小時(shí)，然后隔24小時(shí)又如法蒸1次，連續(xù)3次，就可達(dá)到滅菌目的。 培養(yǎng)基的滅菌效果要經(jīng)常檢驗(yàn)，是否滅菌徹底：一般情況下，滅菌后的培養(yǎng)基最好應(yīng)放在要培養(yǎng)的溫度下，空白培養(yǎng)1周，可檢查滅菌效果。如果在這一段時(shí)間內(nèi)培養(yǎng)基沒發(fā)生任何變化，說明滅菌效果良好，可以使用。
