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    菌種制作基礎(chǔ):平菇一級(jí)菌種培養(yǎng)基制備方法


    【發(fā)布日期】:2010-07-13
         培養(yǎng)基雖然種類(lèi)繁多,配方各異,但配制方法基本相同,都要經(jīng)過(guò)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的選擇、稱(chēng)量調(diào)配、調(diào)節(jié)pH、分裝和滅菌等步驟。
        (1)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的選擇:
      平菇一級(jí)種培養(yǎng)基的選擇是根據(jù)一級(jí)種的用途和當(dāng)時(shí)材料獲得的難易決定的。如配制生產(chǎn)用的一級(jí)種培養(yǎng)基,就可選擇上述配方中的任何一種,而配制菌種保藏用的培養(yǎng)基就必須用配方(8)。平菇一級(jí)種培養(yǎng)基使用的材料中,有些材料的種類(lèi)、濃度、化學(xué)成分相對(duì)穩(wěn)定,如磷酸二氫鉀、硫酸鎂等,有些天然植物體或動(dòng)植物提取的成分相對(duì)不甚穩(wěn)定,要十分注意,如馬鈴薯、蛋白胨、麥麩等。
        發(fā)芽的馬鈴薯不能直接使用。使用時(shí)要將剛剛出現(xiàn)的萌芽深深挖掉,否則芽眼處的龍葵堿,對(duì)平菇菌絲生長(zhǎng)有毒害作用。出芽較大的馬鈴薯不能使用。木屑、麥麩、玉米粉、棉籽殼等農(nóng)副產(chǎn)品,使用前要認(rèn)真檢查,生蟲(chóng)、發(fā)霉和不新鮮的不能使用,昆蟲(chóng)的代謝物和霉菌產(chǎn)生的毒素都對(duì)平菇菌絲有毒害作用。不夠潔凈的瓊脂要事先浸泡沖洗去雜。
        (2)稱(chēng)量:
      培養(yǎng)基配方中標(biāo)出的水1000ml,實(shí)際上是將各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)都容于水后的營(yíng)養(yǎng)液的容量,而不完全是水。配制好后,最后總?cè)萘窟_(dá)到1000ml。
        (3)調(diào)配:
      植物體材料煮沸用其汁,一般煮沸20~30min,用2~4層紗布過(guò)濾。如馬鈴薯、玉米粉、木屑、麥麩等。難溶解的物質(zhì)先溶解,如蛋白胨,然后再加入易溶解的物質(zhì)?;瘜W(xué)試劑后加入,不斷攪拌使其均勻,而不與植物體材料一起煮沸。如葡萄糖、磷酸二氫鉀、硫酸鎂等。
        在水煮取汁的過(guò)程中,水不足時(shí)可加水至足量,調(diào)配到最后,容量不足時(shí)可加水補(bǔ)足至1000ml。
        (4)調(diào)節(jié)pH:
      不同平菇品種生長(zhǎng)發(fā)育最適pH不同,不同地區(qū),不同水源的pH也不同。因此,需要調(diào)節(jié)。通常先用pH試紙測(cè)定已調(diào)配好的培養(yǎng)基,然后再用稀酸或稀堿溶液調(diào)節(jié)。平菇一級(jí)種的pH調(diào)節(jié)常用的酸性溶液是檸檬酸和乙酸溶液,常用的稀堿溶液是碳酸氫鈉和碳酸鈉液。
        (5)分裝:
      培養(yǎng)基調(diào)配好后,調(diào)節(jié)好pH即可分裝。一級(jí)種常用的是玻璃試管,規(guī)格為18~20cm(長(zhǎng))18~20mm(口徑)。分裝試管的裝置可以使用漏斗式分裝器,也可以自行設(shè)計(jì)使用倒“V”字形虹吸式分裝器。分裝時(shí),在漏斗中或燒杯中加滿(mǎn)培養(yǎng)基。這后一種分裝器,分裝前要用吸球先將培養(yǎng)基吸至低于燒杯中培養(yǎng)基的液面,然后才能分裝。一手執(zhí)自由夾控制培養(yǎng)基的流動(dòng),另一手執(zhí)試管接受流下來(lái)的培養(yǎng)基,達(dá)到所需量時(shí),關(guān)閉自由夾。如此反復(fù)分裝至完畢。分裝時(shí)要注意:①流出的培養(yǎng)基不要沾在近管口的壁上,以防日后棉塞生霉,一旦管口附近沾有培養(yǎng)基,待凝固后用接種鉤扒出,并用潮濕潔凈的紗布擦拭干凈;②培養(yǎng)基裝至試管的1/5~1/4處,不可過(guò)少,也不必過(guò)多。
        分裝完畢后加蓋棉塞。棉塞要用干凈的新棉花制做。棉塞要上下粗細(xì)均勻,松緊合適,以塞好后手提時(shí)不掉為宜。棉塞的長(zhǎng)度以塞入試管內(nèi)1.5~2.0cm,外露1.5cm左右為宜。然后7支或10支捆成一捆,管口端用牛皮紙或防潮紙包好扎緊,以防滅菌時(shí)冷凝水打濕棉塞。
        (6)滅菌:
      試管分裝打捆后,豎立于滅菌鍋內(nèi)滅菌。這是培養(yǎng)基制備的重要一步。滅菌效果是否良好,是關(guān)系到培養(yǎng)基能否使用的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一。這一步既要求滅菌徹底,又要求營(yíng)養(yǎng)成分不致改變。因此,要使用高壓蒸汽滅菌。
        使用高壓鍋滅菌時(shí),要先加足水,將試管豎直碼放,加蓋擰好,然后接通熱源加熱。由于不同型號(hào)的高壓鍋內(nèi)部構(gòu)造不完全相同,所以,使用中的操作要嚴(yán)格按產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。當(dāng)壓力達(dá)到0.1~0.11MPa開(kāi)始計(jì)時(shí),保持這一壓力30min,即可達(dá)到滅菌目的。滅菌完畢后,待壓力降至零后排氣、開(kāi)蓋,將培養(yǎng)基趁熱擺成斜面。待凝固后,抽取10~20支試管斜面于28℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24~28h,以檢查滅菌效果。培養(yǎng)后若培養(yǎng)基表面無(wú)微生物生長(zhǎng),表明滅菌成功,可以使用。如有微生物出現(xiàn),則滅菌不徹底,不能使用,要再行滅菌后倒出,洗滌試管,重新制備。當(dāng)時(shí)不用的試管斜面可保存在清潔干燥避光的地方,以備隨時(shí)取用。制備一級(jí)種培養(yǎng)基時(shí),配制和滅菌要緊密銜接,不可隔夜滅菌。
      可以用來(lái)制備平菇一級(jí)種的培養(yǎng)基很多,常用的有PDA培養(yǎng)基、PDA綜合培養(yǎng)基、PDYA綜合培養(yǎng)基、PDPA綜合培養(yǎng)基、木屑綜合培養(yǎng)基、麥麩綜合培養(yǎng)基、玉米粉綜合培養(yǎng)基等。
        常用配方
        (1)PDA培養(yǎng)基:
        馬鈴薯(去皮)200g 葡萄糖 20g 瓊脂 10~20g 水 1000ml pH6.2~6.5
        (2) PDA綜合培養(yǎng)基:
        馬鈴薯(去皮)200g 葡萄糖 20g 瓊脂 10~20g 水 1000ml pH6.2~6.5 硫酸二氫鉀 2g 硫酸鎂 0.5g
        (3)PDYA綜合培養(yǎng)基:
        馬鈴薯(去皮)200g 葡萄糖 20g 瓊脂 10~20g 水 1000ml pH6.2~6.5 硫酸二氫鉀 2g 硫酸鎂 0.5g 酵母粉 2g
        (4)PDPA綜合培養(yǎng)基:
        馬鈴薯(去皮)200g 葡萄糖 20g 瓊脂 10~20g 水 1000ml pH6.2~6.5 硫酸二氫鉀 2g 硫酸鎂 0.5g 蛋白胨 2g
        (5)木屑綜合培養(yǎng)基:
        馬鈴薯(去皮)200g 葡萄糖 20g 瓊脂 10~20g 水 1000ml pH6.2~6.5 硫酸二氫鉀 2g 硫酸鎂 0.5g 闊葉木屑 100g
        (6)麥麩綜合培養(yǎng)基:
        馬鈴薯(去皮)200g 葡萄糖 20g 瓊脂 10~20g 水 1000ml pH6.2~6.5 硫酸二氫鉀 2g 硫酸鎂 0.5g 麥麩 50~100g
        (7)玉米粉綜合培養(yǎng)基:
        玉米粉 50~100g 馬鈴薯(去皮)200g 葡萄糖 20g 瓊脂 10~20g 水 1000ml pH6.2~6.5 硫酸二氫鉀 2g 硫酸鎂 0.5g
        (8) 保藏用培養(yǎng)基:
        馬鈴薯(去皮)200g 葡萄糖 20g 瓊脂 10~20g 水 1000ml pH6.2~6.8 硫酸二氫鉀 3g 硫酸鎂 1.5g 維生素B1 微量
      培養(yǎng)基配制原則和種類(lèi)
      1. 配制原則
      培養(yǎng)基的配制要遵循以下原則:
        (1)要含有所培養(yǎng)的菌株生長(zhǎng)所需要的各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),如糖類(lèi)、有機(jī)氮、礦物質(zhì)等。
        (2)所含的養(yǎng)分濃度適宜,比例平衡,利于培養(yǎng)物的吸收利用。如一級(jí)種培養(yǎng)基糖的濃度以2%為宜,過(guò)高和過(guò)低都對(duì)平菇菌種生長(zhǎng)不利。
        (3)要有適宜的pH和緩沖能力。生物的代謝都是在一定的pH范圍內(nèi)進(jìn)行的,沒(méi)有適宜的pH,就不能正常生長(zhǎng)。另外,生物在生長(zhǎng)過(guò)程中,產(chǎn)生有機(jī)酸釋放于基質(zhì)中,使基質(zhì)逐漸變酸,甚至酸至pH不適于生物的生長(zhǎng)和生存。因此,培養(yǎng)基一定要具備一定的緩沖能力,以減少培養(yǎng)物生長(zhǎng)后期或保藏期間產(chǎn)生的有機(jī)酸對(duì)自身的不良影響。
        (4)一定的氧化還原電位。
        (5)用的各種成分要視其化學(xué)性質(zhì)調(diào)配,防止混合后發(fā)生反應(yīng),生成不利于平菇菌種生長(zhǎng)的物質(zhì)。
        2. 培養(yǎng)基的種類(lèi)
      按培養(yǎng)基的狀態(tài),可以分為液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基兩大類(lèi);按培養(yǎng)基的成分可以分為天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基和半合成培養(yǎng)基三大類(lèi);按用途可分為普通培養(yǎng)基、選擇性培養(yǎng)基和菌種保藏用培養(yǎng)基三大類(lèi)。
        液體培養(yǎng)基:這是一類(lèi)不加凝固劑的培養(yǎng)基,凡不以植物體直接作培養(yǎng)基成分的培養(yǎng)基都可以根據(jù)需要配制成液體培養(yǎng)基。用液體培養(yǎng)基培養(yǎng)的菌種稱(chēng)液體菌種。
        固化固體培養(yǎng)基:固化培養(yǎng)基是在營(yíng)養(yǎng)液中加凝固劑而成,凝固劑有瓊脂(洋菜)、明膠和硅膠三種。食用菌的培養(yǎng)基常用的凝固劑是瓊脂。除此之外,還有直接用植物體制成的固體培養(yǎng)基,如棉籽殼、玉米芯、稻草、麥粒、玉米粒等,用以生產(chǎn)二級(jí)種和三級(jí)種。凡用固體培養(yǎng)基培養(yǎng)的菌種稱(chēng)固體菌種。
        天然培養(yǎng)基:天然培養(yǎng)基是用天然的動(dòng)植物組織等為原料配制成的。所含成分復(fù)雜,化學(xué)成分不清,材料來(lái)源廣泛是平菇菌種生產(chǎn)中最常用的培養(yǎng)基。
        合成培養(yǎng)基:合成培養(yǎng)基是用成分以知的化學(xué)藥品配制而成的培養(yǎng)基,成分清楚,常用來(lái)做精確的遺傳學(xué)和生理生化方面的研究。這類(lèi)培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分較天然和半人工合成培養(yǎng)基單調(diào)得多,不宜于生產(chǎn)上使用。
        半合成培養(yǎng)基:這類(lèi)培養(yǎng)基由成分以知的化學(xué)藥品和成分復(fù)雜的天然物質(zhì)混合而成,如常用的PDA培養(yǎng)基、PDYA培養(yǎng)基等。平菇一級(jí)種使用的正是這類(lèi)培養(yǎng)基。
        普通培養(yǎng)基:這類(lèi)培養(yǎng)基常用來(lái)進(jìn)行日常生產(chǎn),一般菌種完成培養(yǎng)要及時(shí)使用。這類(lèi)培養(yǎng)基配制時(shí)不需考慮太大的緩沖能力。
        選擇性培養(yǎng)基:這是專(zhuān)門(mén)為某一種微生物生長(zhǎng)而配制的培養(yǎng)基,如感染某種細(xì)菌的平菇一級(jí)種可以用含有10%棉籽殼浸出液的PDA培養(yǎng)基繼代培養(yǎng)數(shù)次,即可得到純化,這種培養(yǎng)基利于平菇菌絲生長(zhǎng),而抑制細(xì)菌生長(zhǎng),實(shí)屬選擇性培養(yǎng)基。
        菌種保藏用培養(yǎng)基:這類(lèi)培養(yǎng)基專(zhuān)門(mén)用來(lái)菌種保藏。配制時(shí)要注意:①養(yǎng)分不能過(guò)剩,以防徒長(zhǎng);②有較大的緩沖能力。因此,菌種保藏用培養(yǎng)基要養(yǎng)分略貧,適量加大緩沖容大的鹽類(lèi),如磷酸二氫鉀、硫酸鎂等。
      來(lái)源:[《中國(guó)平菇生產(chǎn)》]   轉(zhuǎn)自:普寧山區(qū)信息網(wǎng) 收錄時(shí)標(biāo)題作了修改
     
     
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