【作者】姜寧宋春艷劉建雨譚琦章爐軍尚曉冬

【機構】上海海洋大學食品學院上海市農業(yè)科學院食用菌研究所國家食用菌工程技術研究中心

摘要：香菇Lentinula edodes是世界第二大食藥用真菌,隨著其全基因組測序的完成,功能基因組學研究也逐漸展開,建立穩(wěn)定的香菇轉化體系是目前的研究熱點。本文將探索以農桿菌為介導的遺傳轉化體系在香菇中進行隨機插入突變的轉化效率以及穩(wěn)定性。構建的質粒p YN6982以潮霉素抗性基因hyg作為篩選標記基因,以增強型熒光蛋白基因egfp作為報告基因,以農桿菌EHA105和LBA4404為介導,同時轉化了孢子單核體、原生質體單核體和雙核體菌株。結果表明采用小米粒培養(yǎng)基進行菌絲培養(yǎng)和轉化,經潮霉素抗性篩選,以及5代傳代后,對轉化子中的hyg和egfp基因進行PCR擴增和測序,驗證了轉化子的遺傳穩(wěn)定性。經過熒光顯微觀察表明,EGFP在轉化子中可穩(wěn)定表達。本研究探索出一種采用小米粒培養(yǎng)基培養(yǎng)菌絲并進行轉化的新方法,建立了穩(wěn)定的農桿菌介導的香菇遺傳轉化體系,為進一步開展香菇的基因功能研究奠定了良好的基礎。 

 

基金：現(xiàn)代農業(yè)產業(yè)技術體系建設專項資金資助(CARS24)； 上?？萍寂d農重點攻關項目[滬農科攻字(2015)第5-1號]~~；

 

關鍵詞：香菇; 單核體菌絲; 農桿菌; 潮霉素; 綠色熒光蛋白;