【作者】秦文彥 程潔 應(yīng)盛華 馮明光

【機(jī)構(gòu)】浙江大學(xué)微生物研究所浙江出入境檢驗(yàn)檢疫局技術(shù)中心浙江大學(xué)微生物研究所 杭州310058杭州310012

【摘要】根據(jù)黃曲霉毒素生化途徑中的關(guān)鍵調(diào)控基因aflR、omt-1和ver-1的序列以及真菌共有的5.8S rDNA的ITS序列分別設(shè)計(jì)ApaF/ApaR、OmtF/OmtR、VerF/VerR及ITS1/ITS4四對(duì)引物,研究建立產(chǎn)黃曲霉毒素真菌及其潛在飼料或食品污染的多重PCR快速靈敏檢測(cè)體系。PCR擴(kuò)增的4個(gè)DNA片段中,1032bp、797bp和600bp與基因庫(kù)中對(duì)應(yīng)基因或DNA序列的同源性達(dá)99%以上,僅452bp片段與對(duì)應(yīng)基因ver-1的同源性為98%。通過(guò)優(yōu)化主要影響因子,建立了快速檢測(cè)產(chǎn)黃曲霉毒素真菌的單管多重PCR反應(yīng)體系,并用于6種曲霉和1種青霉DNA樣品的檢測(cè)。結(jié)果顯示,上述4個(gè)片段均平行地清晰出現(xiàn)在2株黃曲霉Aspergillus flavus和1株寄生曲霉A.parasiticus的DNA樣品中,而其余菌種只檢測(cè)到ITS片段,說(shuō)明檢測(cè)特異性很好。靈敏性分析表明,多重PCR檢測(cè)的保守靈敏度為1ng/μL樣品DNA,所有目標(biāo)片段的條帶均很清晰;即使DNA濃度降至0.1ng/μL,除aflR之外的所有條帶也可分辨。  

【基金】國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢疫總局資助項(xiàng)目(No.2006IK151)；

【關(guān)鍵詞】黃曲霉毒素; 曲霉; 青霉; 快速檢測(cè)體系; 反應(yīng)條件優(yōu)化; 特異性; 靈敏性;