具體步驟
1.計算。按照選定的培養(yǎng)基配方,計算各種成分的用量。
2.稱量。用天平秤取各種物質,馬鈴薯去皮去芽眼,削掉青綠部分,對不易稱量的成分,可用玻棒和燒杯稱重,微量元素等需要量少,難以稱準時,可先配成較濃的原液,再從中取出需要的量。
3.配制。若配制合成培養(yǎng)基,先量取蒸餾水,加入瓊脂,加熱溶化;再加入稱好的其他物質。為避免發(fā)生沉淀造成營養(yǎng)損失,加入的順序一般是先加緩沖劑,再依次加入主要元素、微量元素和維生素等;若各種成分均不發(fā)生沉淀,也可一起加入。
4.煮汁,去濾液。馬鈴薯切成1㎝見方的小塊或2~3㎜厚的薄片,加水約1200ml煮沸,再用文火保持20~30分鐘、并適當攪拌,使營養(yǎng)物質充分溶解出來,然后用4層預濕的紗布過濾,取其濾液。
5.補足水量,加藥品溶化。補足水量至1000ml,然后往濾液中加入瓊脂,小火加熱,攪拌至瓊脂完全溶解,再加入葡萄糖和其他營養(yǎng)物質使其溶化后,用PH試紙檢測其PH值,可根據(jù)需要使用氫氧化鈉和鹽酸,調整適宜的酸堿度,進行分裝。注意開鍋攪拌,防止溢出或焦底。
6.分裝試管。制備好的培養(yǎng)基應趁熱分裝,可用玻璃試管,首先把較大的玻璃漏斗固定在滴定架上,下接一段乳膠管和玻璃管,用彈簧夾夾住膠管。手拿試管,分裝量掌握在試管長度的四分之一。注意分裝時,培養(yǎng)基不能粘在試管口壁上,否則會污染棉塞。
7.賽棉塞,注意要松緊適度。
8.高壓鍋滅菌30分鐘。