高壓蒸汽滅菌和常壓蒸汽滅菌統(tǒng)稱(chēng)濕熱滅菌。其原理是通過(guò)飽和蒸汽殺死物體上和介質(zhì)中的全部病原微生物及其孢子和芽孢。濕熱滅菌的飽和蒸汽具有很強(qiáng)的穿透力,可以破壞病原微生物及其孢子和芽孢的核酸、使蛋白質(zhì)變性凝固、酶失去活性。高壓蒸汽滅菌器是一個(gè)可密閉的容器,由于蒸汽不能逸出,水的沸點(diǎn)隨著壓力的增加而提高,因而加強(qiáng)了蒸汽的穿透力,可以在較短的時(shí)間內(nèi)達(dá)到滅菌的效果。理論上講木屑、棉殼等固體培養(yǎng)基的滅菌須121℃(1.2~1.5公斤/平方厘米)下維持1.5~2.5小時(shí)。而常壓蒸汽滅菌由于滅菌設(shè)備不密封,滅菌效果不如高壓滅菌迅速,所需時(shí)間也要多得多。一般常壓蒸汽滅菌先用大火使水溫升至沸點(diǎn),維持10~12小時(shí),至結(jié)束時(shí)再用旺火燒1小時(shí),然后慢慢冷卻,才能提高滅菌效果。從原來(lái)習(xí)慣使用常壓蒸汽滅菌改為高壓蒸汽滅菌的栽培戶(hù)應(yīng)注意以下幾方面: 1、塑料袋的選擇不同 常壓蒸汽滅菌一般選用聚乙烯薄膜,而高壓蒸汽滅菌應(yīng)選用聚丙烯薄膜,厚度為5~6絲,過(guò)薄,耐壓和耐熱能力低,會(huì)影響成品率。聚乙烯薄膜不耐高壓,在1.2公斤/平方厘米高壓下會(huì)融化,不能使用。2、消毒壓力和溫度不能過(guò)高,高壓蒸汽消毒壓力比較高,但由于培養(yǎng)基包裝大多使用塑料薄膜,消毒壓力不能超過(guò)1.4公斤/平方厘米,可以通過(guò)延長(zhǎng)消毒時(shí)間至2小時(shí)左友來(lái)達(dá)到消毒效果。消毒壓力和溫度過(guò)高,薄膜會(huì)出現(xiàn)融化或膨脹,產(chǎn)生裂縫、小洞,接種后易感染雜菌。3、消毒時(shí)間應(yīng)隨培養(yǎng)基質(zhì)不同而不同,一般而言,顆粒大的消毒時(shí)間長(zhǎng),麥粒、玉米作為基質(zhì)時(shí)的消毒時(shí)應(yīng)該長(zhǎng)于木屑。4、加壓過(guò)程中應(yīng)先放盡鍋內(nèi)冷氣,由于高壓鍋加熱初始鍋內(nèi)存有冷空氣,開(kāi)始加熱后,熱蒸汽集聚在鍋的上部,越聚越多,壓力越來(lái)越高,冷空氣卻還集聚底部,這時(shí)壓力表上顯示的壓力是虛假的,只有把底部的冷空氣放掉,顯示的才是真實(shí)的壓力。方法是加熱后,當(dāng)壓力表壓力達(dá)到0.5公斤/平方厘米時(shí),打開(kāi)放氣閥,放盡空氣,再加熱滅菌。如能放二次空氣,效果會(huì)更好。5、加熱升溫和放氣減壓要慢,塑料袋的薄膜是軟性的,高壓鍋加熱和減壓過(guò)程中塑料袋內(nèi)外存有壓力差,加熱或減壓過(guò)快,內(nèi)外壓力差異就大,容易引起塑料袋變形或脹袋、裂縫,接種后易感染雜菌。另外,在
菌種袋外套一件,可以減少因裝袋、搬運(yùn)、接種過(guò)程中硬物碰撞造成的塑料袋破損。