【作者】張雷剛 羅淑芬 周宏勝 胡花麗 李鵬霞

【機構】江蘇省農(nóng)業(yè)科學院農(nóng)產(chǎn)品加工研究所江蘇省農(nóng)業(yè)科學院園藝產(chǎn)品產(chǎn)后處理工程實驗室

摘要：以生防真菌黑附球菌原生質(zhì)體為受體、潮霉素抗性基因(hph)為篩選標記,應用PEG介導法進行了遺傳轉化體系的研究。潮霉素敏感性測試結果表明,黑附球菌對潮霉素的耐受濃度為50mg/L。PEG介導的黑附球菌原生質(zhì)體最佳遺傳轉化體系為:30℃下用2%裂解酶酶解黑附球菌菌絲2h,過濾收集原生質(zhì)體,經(jīng)MTC清洗重懸后將質(zhì)粒p YF11-hph轉化黑附球菌原生質(zhì)體,在RM培養(yǎng)基中混勻再生;經(jīng)潮霉素藥劑篩選和PCR驗證,表明外源基因hph已轉入到黑附球菌中并獲得穩(wěn)定表達。本實驗成功地建立了穩(wěn)定的PEG介導的黑附球菌遺傳轉化體系,為研究其代謝途徑、生防機制及構建工程菌株提供了技術保障。 

 

基金：農(nóng)作物生物災害綜合治理教育部重點實驗室/農(nóng)業(yè)部華東作物有害生物綜合治理重點實驗室開放基金； 江蘇省農(nóng)業(yè)科技自主創(chuàng)新資金[CX(17)3012]~~；

 

關鍵詞：PEG介導; 黑附球菌; 遺傳轉化; 原生質(zhì)體; 工程菌株;