【作者】吳清平；周小燕；鐘瑜；陳素云；

【機(jī)構(gòu)】廣東省微生物研究所；廣東省微生物研究所 廣州 510070；

【摘要】從73個尖孢鐮孢(Fusarium oxysporum)不同專化型菌株上獲得684個硝酸鹽營養(yǎng)突變株(nit mutant)。作相關(guān)氮源利用試驗(yàn)及亞硝酸反應(yīng)后,鑒定出一新硝酸鹽營養(yǎng)突變類型:亞硝酸鹽還原酶結(jié)構(gòu)基因類型,命名為nit8,占總突變株的6.7%。同時被鑒別的還有nit1、nit3和Nit M三種突變類型,它們分別占突變株總數(shù)的81.0%,3.8%和8.5%。此外,首次引入一種亞硝酸反應(yīng)在這類研究中的應(yīng)用,還提出了互補(bǔ)指數(shù)概念與公式來表示nit突變株?duì)I養(yǎng)體之間親和的能力。通過廣泛收集和分離,獲得根霉屬（Rhizopus）、曲霉屬（Aspergillus）及裂褶菌屬（Schizophyllum）等屬菌株897株。產(chǎn)酸指示平板上的變色圈測定結(jié)果表明,它們中間628株為產(chǎn)酸菌。通過紙層析對產(chǎn)酸菌發(fā)酵液酸譜的分析,獲得129株L-蘋果酸產(chǎn)生菌,經(jīng)進(jìn)一步測定發(fā)酵液中L-蘋果酸的含量,篩選出以葡萄糖為原料,搖瓶發(fā)酵140小時,L-蘋果酸產(chǎn)率48.37g/L,對糖轉(zhuǎn)化率48.37×10-2的菌株LM02。經(jīng)初步鑒定,這一菌株為曲霉（Asper-gillus sp.）以LM02作為出發(fā)株,采用亞硝基胍、自然污染細(xì)菌、甲基磺酸乙酯及紫外線進(jìn)行誘變處理,選育出葡萄糖為原料,L-蘋果酸產(chǎn)率較高的突變株N1-14、N1-14′、NE1412、NU1416及NU1419。其中N1-14′的L-蘋果酸產(chǎn)量最高,比出發(fā)株提高46.2×10-2。N1-14′的菌絲生長速度快,產(chǎn)孢能力強(qiáng),搖瓶發(fā)酵葡萄糖140小時,平均L-蘋果酸產(chǎn)率為72.53g/L,對糖轉(zhuǎn)化率53.74×10-2。全發(fā)酵液經(jīng)薄層層析測定,不含黃曲霉毒素。發(fā)酵產(chǎn)物分離提純后,得到白色粉末狀結(jié)晶,經(jīng)紙層析、質(zhì)譜及紅外光譜測定,證明為L-蘋果酸。  

【關(guān)鍵詞】L-蘋果酸產(chǎn)生菌；曲霉；篩選；誘變；鑒定；

【基金】廣東省八五攻關(guān)項(xiàng)目；