金針菇產(chǎn)植酸酶菌株的篩選及植酸酶基因區(qū)域的克隆 劉世強　 郭麗瓊　 林俊芳　 郭安平　 摘　要：從金針菇(Flammulina velutipes)7個菌株中篩選出1株高產(chǎn)植酸酶菌株.根據(jù)GenBank中植酸酶基因的保守區(qū)設(shè)計并合成一對特異性引物,以金針菇菌絲的總DNA為模板,通過PCR擴增,獲得了一條長約790bp的片段.DNA序列測定結(jié)果表明,該片段長度為788bp,采用Blast軟件進行序列比對發(fā)現(xiàn),該片段與平田頭菇(Agrocybe pediades)的植酸酶基因phy(GenBankAccession:CAC48160)編碼的氨基酸具有64%的序列同源性.該片段含有2個內(nèi)含子,含有植酸酶基因的活性位點高度保守序列(Active-site sequence)-RHGXRXPT[1]. 關(guān)鍵詞：金針菇;植酸酶;篩選;克隆 分類號：S646.150.1 　文獻標(biāo)識碼：A 文章編號：1005-9873(2005)03-0001-06 The Screening of Flammulina velutipes Strain Producing Phytase and Cloning of Its Phytase Gene Region LIU Shi-qiang　 GUO Li-qiong　 LIN Jun-fang　 GUO An-ping　 基金項目：國家自然科學(xué)基金資助項目"草菇冷凍脅迫誘導(dǎo)表達基因及其啟動子的克隆分離"(編號:30060054)和"食用菌外源基因表達系統(tǒng)的建立"(編號:30371000)的部分研究內(nèi)容 作者簡介：劉世強(1978-),男,2005年畢業(yè)于華南熱帶農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院作物遺傳育種專業(yè),碩士,主要從事食用菌的基因工程研究與開發(fā),發(fā)表主筆論文1篇. 作者單位：劉世強（中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物生物技術(shù)國家重點實驗室,?？?571701）　 　　　　　郭麗瓊（中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物生物技術(shù)國家重點實驗室,?？?571701;華南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院生物工程系,廣州,510640）　 　　　　　林俊芳（中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物生物技術(shù)國家重點實驗室,?？?571701;華南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院生物工程系,廣州,510640）　 　　　　　郭安平（中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物生物技術(shù)國家重點實驗室,海口,571701）　 參考文獻： [1]Wodzinski RJ, Ullah AH. Advances in applied microbiology[J]. Phytase, 1996,42:263～302. [2]Schwarz G, Hoppe PP. Phytase enzyme to curb pollution from pigs and poultry[J]. Feed Magazine, 1992,22～26. [3]Lambrechts C, Boze H. Utilization of phytate by some yeast[J]. Biotechnology Letters, 1992,14(1):61～66. [4]Lei Xinggen,Ku PK, Miller ER, et al. Supplementing corn-soybean meal diets with microbial phytase P utilization by weanling pigs[J]. Animal Science, 1993,71:3368～3375. [5]Nagashima T, Tange T, Anazaws H. Dephosphorulation of phytate by using the Aspergillus niger phytase with a high affinity for phytate[J]. Appl Environ Microbial, 1999,65(10):4682～4684. [6]Sharma CB,Goel M, Irshad M. Myo-inositol hexaphosphate as a potential inhibitor of a-amylases of different origins[J]. Phytochemistry, 1978,17:201～204. [7]J.薩姆布魯克D.w.拉賽爾(黃培堂譯).分子克隆實驗指南[M].北京:科學(xué)出版社,2002.26～27,96～99. [8]Tomschy A, Tessier M, Wyss M, et al. Optimization of the catalytic properties of Aspergillus fumigatus phytase based on the three-dimensional structure[J]. Protein Sci, 2002,9(7):1304～1311. [9]姚斌,張春義,王建華,等.產(chǎn)植酸酶的黑曲霉菌株篩選及其植酸酶基因克隆[J].農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報,1998,6(1):1～6. [10]彭日荷,熊愛生,李賢,等.應(yīng)用畢氏酵母高效表達耐高溫植酸酶[J].生物化學(xué)與生物物理學(xué)報,2002,34(6):725～730. [11]Stahl CH, Wilson DB, Lei XG. Comparison of extracellular Escherichia coli AppA phytases expressed in Streptomyces lividans and Pichia pastoris [J]. Biotechnol Lett, 2003,25(10) :827～831. 食用菌學(xué)報 2005年第3期-HTM文件 No.1