香菇ras和gpd啟動子的克隆與功能鑒定 于曉玲　 林俊芳　 郭麗瓊　 王樹昌　 摘　要：以香菇基因組DNA為模板,利用PCR技術(shù)克隆了香菇1個ras啟動子Lras,2個gpd啟動子Lgpd1和Lgpd2.這3個啟動子的大小分別為715bp、1056bp和611bp,與已報道的ras和gpd啟動子的同源性很強.對這3個啟動子的分析結(jié)果表明,它們都含有豐富的啟動子順式作用元件.將這些啟動子片段分別與GUS基因連接構(gòu)建了表達載體,并將這些表達載體導入草菇菌絲體中,檢測其活性,最終顯示3個片段都有啟動GUS基因表達的能力,其中Lgpd1啟動子活性最強,Lras啟動子次之,Lgpd2最弱. 關(guān)鍵詞：香菇;ras啟動子;gpd啟動子;原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化;GUS基因 分類號：S646.120.36 　文獻標識碼：A 文章編號：1005-9873(2005)03-0015-06 Cloning and Characterization of ras and gpd Promoters from Lentinus edodes Yu Xiao-ling　 Lin Jun-fang　 Guo Li-qiong　 Wang Shu-chang基金項目：國家自然科學基金資助項目"抗冷凍蛋白基因遺傳轉(zhuǎn)化草菇的研究"(編號:39960050),"草菇冷凍脅迫誘導表達基因及其啟動子的克隆分離"(編號:30060054),"食用菌外源基因表達系統(tǒng)的建立"(編號:30371000)和廣東省自然科學基金資助項目"食用菌外源基因表達系統(tǒng)的建立"(編號:032239)的部分研究內(nèi)容 作者簡介：于曉玲(1979-),女,2004年畢業(yè)于華南熱帶農(nóng)業(yè)大學作物遺傳育種專業(yè),碩士,助理研究員,主要從事基因工程與分子生物學研究. 作者單位：于曉玲（中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院熱帶作物生物技術(shù)國家重點實驗室,熱帶生物技術(shù)研究所,?？?571101）　 　　　　　林俊芳（中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院熱帶作物生物技術(shù)國家重點實驗室,熱帶生物技術(shù)研究所,?？?571101;華南農(nóng)業(yè)大學食品學院生物工程系,廣州,510640）　 　　　　　郭麗瓊（中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院熱帶作物生物技術(shù)國家重點實驗室,熱帶生物技術(shù)研究所,?？?571101;華南農(nóng)業(yè)大學食品學院生物工程系,廣州,510640）　 　　　　　王樹昌（中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院熱帶作物生物技術(shù)國家重點實驗室,熱帶生物技術(shù)研究所,?？?571101）　 參考文獻： [1]劉春如.香菇的分布概況及生物學特性[J].中國林副特產(chǎn),2001,11(4):32～33. [2]曲章義,牛美娟,郭彩玲.香菇多糖抗腫瘤作用機理[J].中國食用菌,1997,16(5):3～5. [3]芮菁.香菇多糖的藥理作用和臨床應用概況[J].天津藥學,2000,12(1):34～36. [4]Mooibroek H, Kuipers AGJ, Sietsma JH, et al. Introduction of hygromycin B resistance into Schizophyllum commune: Preferential methylation of donor DNA[J]. Mol Gen Genet, 1990,222:41～48. [5]Osamu Ishibashi, Kazuo Shishido. Nucleaotide sequence of a ras gene from the basidiomycete Coprinus cinereus [J]. Gene, 1993,125(2) :233～234. [6]Hori K, Kajiwara S, Saito T, et al. Cloning, sequence analysis and transcriptional expression of aras gene of the edible basidiomycete Lentinus edodes [J]. Gene, 1991,105(1) :91～96. [7]Challen MP, Bhattiprolu GR, Warner PJ. Cloning the Coprumus bilannatus TRP2 gene and it use as a selectable marker in transformation[J]. Mycology Research, 1994,98(2) :179～185. [8]Goodwen W, Pallas JA, Jenlins GI. Transcripts of a gene encoding a putative cell wall-plasma membrane linker protein are specifically cold-induced in Brassica napus [J ]. Plant Mol Biol, 1996,31:771～ 781. [9]Hirano T, Sato T, Yaegashi K, et al. Efficient transformation of the edible basidiomycete Lentinus edodes with a vector using a glyceraldehydes-3-phosphate dehydrogenase promoter to hygromycin B resistance[J ].Molecular and General Genetics, 2000,263(6):1047～1052. [10]劉世強,楊麗卿,郭麗瓊,等.草菇ras啟動子區(qū)域的克隆及其序列分析[J].食用菌學報,2004,11(1):1～6. [11]溫海洋,肖洪東,黃劍波,等.草菇種內(nèi)原生質(zhì)體融合育種研究[J].北方園藝,2000,3:48～49. [12]王春暉,喻初權(quán),張志光.外源DNA片段導入草菇原生質(zhì)體的研究[J].食用菌學報,1999,6(4):1～6. [13]張志光,李東屏,方芳.絲狀真菌原生質(zhì)體技術(shù)研究[J].湖南師范大學自然科學學報,1998,21(1):60～65. [14]李東屏,張志光,張?zhí)鞎?草菇、銀絲草菇原生質(zhì)分離及再生試驗[J].湖南微生物學通訊,1991,1(3):9～14. [15]儲成才,陳帥,司麗珍.轉(zhuǎn)基因表達的精細調(diào)控[J].杭州師范學院學報(自然科學版),2001,18(4):43～44. [16]郭麗瓊,陳守才,林俊芳.食用菌遺傳轉(zhuǎn)化研究進展[J].食用菌學報,2001,8(4):47～53. 食用菌學報 2005年第3期-HTM文件 No.3